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    二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒

    簡要描述:

    二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶,在決定植物的花色、葉色、果色和其他經濟器官的色澤及其營養品質方面起著重要作用。

    更新時間:2023-08-22;廠商性質:經銷商;覽量:565

    商品詳情:
    二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒測定意義:

     

    二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶,在決定植物的花色、葉色、果色和其他經濟器官的色澤及其營養品質方面起著重要作用。

    貨號

    規格

    檢測方法

    YSH3289

    100管/48樣

    微量法

    YSH3289-1

    50管/24樣

    可見分光光度法

    測定原理:

     

    二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產生兒茶素,可與香草縮合形成紅色化合物,在500nm處有特征吸收峰。

     

    需自備的儀器和用品:

     

    研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
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    1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

    2.細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

    3.血清等液體:直接檢測。

    計算公式如下:

    1、血清(漿)LAP活力的計算:

    單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

    LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

    2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

    1)按樣本蛋白濃度計算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

    LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

    2)按樣本鮮重計算:

    單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

    LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

    3)按細菌或細胞密度計算:

    單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

    LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

    V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。

    注意事項:

    1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。

    2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

    3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

    4.檢出限為100μmol/L。

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